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關(guān)于Tn5轉(zhuǎn)座酶的原理介紹

更新時間:2022-09-15   點擊次數(shù):1824次
  RNA測序(RNA-Seq)是基于二代測序技術(shù)開展轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究過程中廣泛使用的一種方法,能夠在特定時間點對生物樣本中的多種RNA進行定性和定量分析。針對RNA測序的常規(guī)建庫方法都需要先將RNA轉(zhuǎn)換為雙鏈DNA,且需經(jīng)過目標(biāo)RNA富集及片段化、雙鏈DNA合成、接頭連接、PCR擴增等多個步驟。
  Tn5轉(zhuǎn)座酶復(fù)合體因能一步打斷雙鏈DNA并且使DNA兩端帶上接頭,而廣泛應(yīng)用于二代測序建庫等領(lǐng)域。近期也有研究發(fā)現(xiàn),Tn5轉(zhuǎn)座酶同樣能以類似的方式作用于RNA/DNA雜合鏈,從而能夠省去傳統(tǒng)RNA建庫技術(shù)中的RNA片段化、二鏈合成等繁瑣的操作步驟,進一步拓展了Tn5轉(zhuǎn)座酶的新用途。此外,Tn5轉(zhuǎn)座酶也被廣泛用于體外轉(zhuǎn)基因(外源基因整合到宿主細胞)等各領(lǐng)域。
  執(zhí)行轉(zhuǎn)座功能的酶,通常由轉(zhuǎn)座子編碼,識別轉(zhuǎn)座子兩端的特異序列,能把轉(zhuǎn)座子從相鄰序列中脫離出來,再插入到新的DNA靶位點,無同源性要求。
  EZ-Tn5™轉(zhuǎn)座酶具有較高的Tn5轉(zhuǎn)座活性。是高純度,單亞基的酶,可隨機插入EZ-Tn5至任何靶向DNA,每個標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)插入DNA克隆的量為>106,當(dāng)用EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子在沒有鎂離子孵育時,形成穩(wěn)定的EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子復(fù)合體,特定的認識自然發(fā)生的Tn5和微小的Tn5轉(zhuǎn)座反應(yīng)和使EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子具有高活性的端端序列。

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