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蛋白 Pull Down(蛋白和蛋白互作)

更新時(shí)間:2025-05-05

訪問(wèn)量:5875

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

生產(chǎn)地址:

簡(jiǎn)要描述:
Halo Pull Down(蛋白和蛋白互作)技術(shù)是將Halo標(biāo)簽的融合蛋白固相化到磁珠上,與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行孵育,鑒定與之相互作用的蛋白。該方法可以鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鑒定兩個(gè)已知蛋白間是否存在相互作用。
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蛋白Pull down技術(shù)將目標(biāo)蛋白進(jìn)行體外原核表達(dá),使標(biāo)簽蛋白(Halo、GST、His等)與目標(biāo)蛋白融合表達(dá),可以不受抗體、物種限制僅借助標(biāo)簽的親和介質(zhì)將目標(biāo)蛋白純化出來(lái),目標(biāo)蛋白在純化過(guò)程中可以將與其能夠發(fā)生作用的蛋白“下拉”下來(lái),進(jìn)而利用蛋膠、Western Blot或者質(zhì)譜鑒定拉下來(lái)的蛋白質(zhì),這些蛋白即與目標(biāo)蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down實(shí)驗(yàn)還可以通過(guò)外源同時(shí)表達(dá)目標(biāo)蛋白和待測(cè)蛋白,利用Pull down點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的確定它們是否發(fā)生直接的相互作用,也可以?xún)H表達(dá)蛋白質(zhì)的結(jié)合區(qū)域進(jìn)行蛋白Pull down,確定兩個(gè)蛋白結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。

本公司主要提供Halo/GST-tag pull down:Halo-tag pull down是使用體外真核表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)目的蛋白,表達(dá)的目的蛋白攜帶Halo標(biāo)簽;GST-tag pull down是使用大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,表達(dá)的目的蛋白攜帶GST標(biāo)簽,也可以利用其它標(biāo)簽蛋白進(jìn)行pull down實(shí)驗(yàn)。

Halo/FLAG-tag pull down技術(shù)優(yōu)勢(shì):

真核表達(dá)系統(tǒng),蛋白更接近體內(nèi)結(jié)構(gòu)

沒(méi)有細(xì)胞內(nèi)干擾因素的限制,表達(dá)成功率高

蛋白表達(dá)載體構(gòu)建成功后,不需要轉(zhuǎn)化和鑒定,可直接表達(dá)目的蛋白,節(jié)省時(shí)間

步驟 內(nèi)容 交付內(nèi)容 周期
載體構(gòu)建
  • 客戶(hù)提供目的蛋白對(duì)應(yīng)的CDS的序列或質(zhì)粒,

  • 克隆至合適的表達(dá)載體,

  • 質(zhì)粒測(cè)序,

  • 質(zhì)粒制備。

測(cè)序結(jié)果 1-2周
無(wú)細(xì)胞表達(dá)+純化
  • 用小麥芽胚蛋白表達(dá)體系進(jìn)行蛋白表達(dá),

  • 蛋白表達(dá)評(píng)估 (Western Blot) 。

表達(dá)評(píng)估報(bào)告 1周
Pull Down
  • 細(xì)胞裂解,

  • 目的蛋白和總蛋白孵育,

  • 洗脫與目的蛋白結(jié)合的蛋白。

銀染結(jié)果 1周
質(zhì)譜檢測(cè)
  • 將洗脫的蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。

質(zhì)譜結(jié)果 2周

 

客戶(hù)提供材料 交付結(jié)果

新鮮樣本(組織或者細(xì)胞):細(xì)胞數(shù)量>2.7ⅹ107;

組織樣本>3g

載體測(cè)序結(jié)果

實(shí)驗(yàn)過(guò)程圖

質(zhì)譜結(jié)果

蛋白Pull Down 技術(shù)流程

 

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蛋白Pull Down結(jié)果示例

結(jié)果.pngGO結(jié)果.pngKEGG結(jié)果.png

蛋白Pull Down應(yīng)用案例

2023年12月,北京林業(yè)大學(xué)和藍(lán)景科信合作,在植物學(xué)主流學(xué)術(shù)期刊Plant Stress(IF=5.0)上,發(fā)表了題為“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。該研究借助HaloTag pull-down技術(shù)鑒定了胡楊CPK21的互作蛋白,為揭示胡楊CPK21調(diào)控植物Cd耐受的分子機(jī)制研究提供了技術(shù)支撐。

 

 

 

 

 

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