蛋白質(zhì)的制備是一項(xiàng)非常詳盡的作業(yè)。觸及物理學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)的常識(shí)很廣。近年來雖有了不少改善，但其首要原理仍不外乎兩個(gè)方面：一是運(yùn)用混合物中幾個(gè)組分分配率的不同，把它們分配于可用機(jī)械辦法別離的兩個(gè)或幾個(gè)物相中，如鹽析、有機(jī)溶劑提取、層析和結(jié)晶等;二是將混合物置于單一物相中，經(jīng)過物理力場(chǎng)的效果使各組分分配于不同區(qū)域而到達(dá)別離的意圖，如電泳、超離心、超濾等。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)不能溶化，也不能蒸騰，所能分配的物相只限于固相和液相，并在這兩相間相互替換進(jìn)行別離純化。制備辦法可按照分子巨細(xì)、形狀、帶電性質(zhì)及溶解度等首要因素進(jìn)行分類。按分子巨細(xì)和形狀分為差速離心、超濾、分子篩及透析等辦法;按溶解度分為鹽析、溶劑抽提、分配層析、逆流分配及結(jié)晶等辦法;按電荷差異分為電泳、電滲析、等電點(diǎn)沉積、離子交換層析及吸附層析等;按生物功用專一性有親合層析法等。

　　因?yàn)椴煌锎蠓肿咏Y(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)不同，別離辦法也不一樣。即同一類生物大分子因?yàn)檫x用資料不同，運(yùn)用辦法不同也很大。因而很難有一個(gè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的辦法對(duì)任何蛋白質(zhì)均可循用。因而試驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行充沛調(diào)查研究，查閱有關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)欲別離提純物質(zhì)的物理、化學(xué)及生物學(xué)性質(zhì)先有必定了解，然后再著手進(jìn)行試驗(yàn)作業(yè)。關(guān)于一個(gè)不知道結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的試樣進(jìn)行創(chuàng)造性的別離提純時(shí)，更需要經(jīng)過各種辦法比較和探索，才干找到一些作業(yè)規(guī)則和取得預(yù)期成果。其次在別離提純作業(yè)前，常須樹立相應(yīng)的剖析判定辦法，以正確指導(dǎo)整個(gè)別離純化作業(yè)的順利進(jìn)行。高度提純某一生物大分子，一般要經(jīng)過多種辦法、進(jìn)程及不斷改換各種外界條件才干到達(dá)意圖。因而，整個(gè)試驗(yàn)進(jìn)程辦法的優(yōu)劣，挑選條件效果的好壞，均須經(jīng)過剖析判定來判明。

　　另一方面，蛋白質(zhì)常以與其他生物體物質(zhì)結(jié)合方式存在，因而也易與這些物質(zhì)結(jié)合，這給別離精制帶來了困難。如極微量的金屬和糖對(duì)巨大蛋白質(zhì)的安穩(wěn)性起決定效果，若被除掉則不安穩(wěn)的蛋白質(zhì)結(jié)晶化的難度也隨之增加。如頂峰淀粉酶 A的 Ca2+，胰島素 Zn2+等。此外，高分子蛋白質(zhì)具有必定的立體構(gòu)象，適當(dāng)不安穩(wěn)，如前所述極易變性、變構(gòu)，因而限制了別離精制的辦法。通常是依據(jù)詳細(xì)對(duì)象聯(lián)用各種辦法。為得到天然狀況的蛋白質(zhì)，盡量選用溫文的手法，如中性、低溫、避免起泡等，并還要留意防腐。

　　留意共存成分的影響。如蝮蛇粗毒的蛋白質(zhì)水解酶活性很高，在別離純化中需引起注重。純化蝮蛇神經(jīng)毒素時(shí)，當(dāng)室溫超過 20℃時(shí)，簡(jiǎn)直得不到神經(jīng)毒素。蝮蛇毒中的蛋白水解酶能被 0.1mol/L EDTA徹底按捺，因而在進(jìn)行柱層析前先將粗毒素 0.1mol/LEDTA溶液處理，即使在室溫高于 20℃，仍能很好的得到神經(jīng)毒素。

　　整個(gè)制備進(jìn)程一般可分為 5個(gè)階段：①資料的挑選和預(yù)處理，②細(xì)胞的破碎(有時(shí)需進(jìn)行細(xì)胞器的別離)，③提取，④純化(包含鹽析，有機(jī)溶劑沉積，有機(jī)溶劑提取、吸附、層析、超離心及結(jié)晶等)，⑤濃縮、枯燥及保存。以上 5個(gè)階段不是要求每個(gè)計(jì)劃都完整地具備，也不是每一階段截然分隔。

　　不論是哪一階段運(yùn)用哪一種辦法，均必須在操作中保存生物大分子結(jié)構(gòu)的完整性。保存活性避免變性及降解現(xiàn)象的發(fā)生。因空間結(jié)構(gòu)首要依托氫鍵、鹽鍵和范德華力的存在，遇酸、遇堿、高溫、劇烈的機(jī)械效果及激烈的輻射等均可導(dǎo)致活性損失。因而挑選的條件應(yīng)為非常溫文。一起應(yīng)留意避免體系中重金屬離子、細(xì)胞本身酶系及其他有毒物質(zhì)的污染。

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